La espectrofotometría es un método científico utilizado para medir cuanta luz absorbe una sustancia química, midiendo la intensidad de la luz cuando un haz luminoso pasa a través de la solución muestra, basándose en la Ley de Beer-Lambert. Esta medición también puede usarse para medir la cantidad de un producto químico conocido en una sustancia.
En la espectrofotometría se aprovecha la absorción de radiación electromagnética en la zona del ultravioleta y visible del espectro. La muestra absorbe parte de la radiación incidente en este espectro y promueve la transición del analito hacia un estado excitado, transmitiendo un haz de menor energía radiante. En esta técnica se mide la cantidad de luz absorbida como función de la longitud de onda utilizada. La absorción de las radiaciones ultravioletas, visibles e infrarrojas depende de la estructura de las moléculas, y es característica de cada sustancia química.
La espectrofotometría ultravioleta-visible utiliza haces de radiación del espectro electromagnético, en el rango UV de 180 a 380 nm, y en el de la luz visible de 380 a 780 nm, por lo que es de gran utilidad para caracterizar los materiales en la región ultravioleta y visible del espectro.
Las técnicas colorimétricas se basan en la medida de la absorción de radiación en la zona visible por
sustancias coloreadas. En algunas ocasiones, la muestra que deseamos determinar no posee color por sí
misma; en tal caso, es preciso llevar a cabo un desarrollo de color empleando reactivos que den lugar a
sustancias coloreadas con la muestra que interesa estudiar.
La colorimetría y fotocolorimetría no son en realidad técnicas distintas y la diferencia estriba en el tipo de
instrumental empleado, de forma que se denomina colorímetro a aquellos aparatos en los que la longitud
de onda con la que vamos a trabajar se selecciona por medio de filtros ópticos; en los fotocolorímetros o
espectrofotómetros la longitud de onda se selecciona mediante dispositivos mono-cromadores.
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